玉米种子纯度SSR分子标记鉴定方法

基础信息

标准简介

 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由沈阳市农业科学院提出。 本标准由沈阳市质量技术监督局归口。 本标准起草单位：沈阳市农业科学院、大连市农业科学院。 本标准主要起草人：杨双、高红治、李金凤、马东梅、王秋艳、潘菊、刘延斌、李雪、张秋颖、 韩明东、杨璐。 玉米种子纯度SSR分子标记鉴定方法 1 范围 本标准规定了玉米种子纯度SSR分子标记鉴定方法的仪器设备及试剂、方法步骤、分子标记筛选、纯度计算方法。 本标准适用于玉米单交种的纯度鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4404.1 粮食作物种子 禾谷类 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 NY/T 1432 玉米品种鉴定DNA指纹方法 3 术语和定义 下列术语及定义适用于本标准。 3.1 种子纯度 Seed Purity 种子在特征特性方面典型一致的程度，本标准中指种子在SSR分子标记带型方面典型一致的程度，用具有本品种特异带型的种子粒数占检测样品种子粒数的百分率表示。 3.2 聚合酶链式反应 PCR（Polymerase Chain Reaction） 一种在体外通过酶促反应扩增特异DNA片段的技术。 3.3 简单重复序列 SSR（Simple Sequence Repeat） 由几个核苷酸（1-6个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp（一般为100-200bp）的串联重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。 3.4 分子标记 Molecular Marker 以蛋白质、核酸分子的多态性为基础，检测生物在遗传上的差异。 3.5 引物 Primer 是指一小段单链DNA，与模板DNA上特异序列互补结合后启动PCR反应。 4 原理 SSR分布于玉米整个基因组，每个位点上重复单位的数目不同造成了品种间的多态性，利用PCR技术将多态的SSR扩增出来，通过电泳检测扩增产物，利用电泳图谱进行玉米种子纯度鉴定。 5 仪器设备及试剂 5.1 仪器设备 PCR仪；测序电泳槽；水平电泳槽；高压电泳仪（3000V，400mA，400W）；万分之一电子天平；微量加样器；磁力搅拌器；台式离心机；紫外-可见成像系统；胶片观察灯；水平摇床；高压灭菌锅；pH计等。 5.2 试剂 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）；三羟甲基氨基甲烷（Tris）；盐酸（HCl，36%）；十二烷基硫酸钠（SDS）；氯化钠（NaCl）；氢氧化钠（NaOH）；硼酸；去离子甲酰胺；溴酚蓝；二甲苯青FF；甲叉双丙烯酰胺；丙烯酰胺；尿素；亲和硅烷；剥离硅烷；无水乙醇；四甲基乙二胺（TEMED）；过硫酸铵；冰醋酸；硝酸银；

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