棉花中转基因成分定性PCR检测方法

基础信息

标准简介

SN/T 1199—2003.1范围SN/T 1199规定了抗鳞翅目昆虫棉花中转基因成分的定性PCR检测方法。SN/T 1199适用于抗鳞翅目昆虫棉花SGK321,SGK9708,GK1,GK2,GK3,GK5,GK12,GK19,GK22、GK95-1(晋棉26号),Bollgard(保铃棉)中转基因成分的定性PCR检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡注明日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法SN/T 1193基因分析检测实验室技术要求SN/T 1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法SN/T 1204植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本标准。3.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列,通过各种导入手段,使其在该物种中进行表达,以便该物种获得新的品种特征。5.2制样称取约10 g棉花样品,在经121℃,30 min高压消毒处理过的研钵中加人液氮快速研磨至样品粉末颗粒约0.5 mm大小,快速装入1.5 mL的离心管中,于—20℃保存。6测定方法6.1原理样品经过提取DNA后,针对转基因植物所插入的外源基因的基因序列设计引物,通过PCR技术，特异性扩增外源基因的 DNA片断,根据PCR扩增结果,判断该样品中是否含有转基因成分。6.2试剂和材料除另有规定外,其他试剂为分析纯或生化试剂,水为按照GB/T6682规定的一级水。6.2.1︰引物根据表1的序列进行引物合成,加水配制成100 p mol/L储存,直接用于PCR测试的引物浓度为5 u mol/L。其中外源基因的有关信息参见附录A。

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